زمینه و هدف: نواحی متغیر آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری ((VHH) یا نانوبادی)، کوچک ترین واحد باند شونده به آنتی ژن ها است. اندازه کوچک نانوبادی ها بزرگ ترین مزیت آن ها می باشد که سبب دستکاری ژنتیکی راحت آن ها می شود. این مطالعه با هدف ساخت کتابخانه آنتی بادی تک دمین از شتر ایمن شده با یک رده سلولی آدنوکارسینومای سینه انسان (SKBR3) طراحی و اجرا شد. روش بررسی: در این مطالعه تجربی ابتدا عصاره سلول SKBR3 طی سه نوبت به صورت زیر پوستی به یک شتر تزریق گردید. سپس RNA کامل از طحال شتر استخراج و قطعات (VHH) به کمک روش RT-PCR ساخته و تکثیر شدند. قطعات (VHH) در درون فاژمید Pcomb3x قرار گرفتند و به روش الکتروپوریشن قطعات نوترکیب وارد باکتری های DH5a شدند. تنوع کتابخانه تهیه شده توسط تکنیک انگشت نگاری آنزیمی مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت بیان (VHH) با روش SDS-PAGE ارزیابی شد. یافته ها: در این پژوهش کتابخانه آنتی بادی شتری با بیش از 105 کلونی ساخته شد.همچنین انگشت نگاری آنزیمی نشان داد که کتابخانه آنتی بادی حاصل دارای تنوع بالایی می باشد. بررسی های اولیه بوسیله SDS-PAGE مشخص کرد که پروتئین (VHH) با وزن مولکولی 15 کیلو دالتون در باکتری های ترانسفورم شده بیان می شود. نتیجه گیری: تهیه کتابخانه آنتی بادی ایمن بر ضد رده سلولی SKBR3، امکان جداسازی آنتی بادی های اختصاصی (VHH) بر ضد آنتی ژن های مختلف سرطان سینه را فراهم می کند.

مقدمه: آنتی بادی منوکلونال علیه آنتی ژن A60 در مایکوباکتریوم بویس دارای کاربردهای فراوانی است که مهم ترین آنها شامل طراحی کیت تشخیصی سریع به روش ELISA برای بیماری سل، و شیمی درمانی برخی از انواع سرطان است.روش بررسی: یکی از متداول ترین روش های تولید آنتی بادی منوکلونال، امتزاج لنفوسیت های B طحال موش های ایمن شده و سلول های میلوما است. در این پژوهش، ابتدا موش های Balb/c ماده، تحت تزریقات منظم BCG و آنتی ژن A60 قرار گرفتند و تیتر آنتی بادی تولید شده پس از هر تزریق مورد بررسی قرار گرفت. پس از اطمینان از ایمن شدن موش ها، بین لنفوسیت های طحالی آنها و سلول های میلومای Sp2.0 با کمک پلی اتیلن گلیکول (50%, PEG) امتزاج برقرار شد و سلول ها در محیط انتخابی HAT قرار گرفتند. بر روی مایع رویی تمام کلون های تشکیل شده، آزمون الایزا انجام گرفت تا کلون های مولد آنتی بادی علیه آنتی ژن A60 شناسایی و انتخاب شدند.یافته ها: طی یک بار فیوژن 62 کلون هیبریدوما به دست آمد که از این تعداد، 2 کلون MB1D5 و MB3F8 که مولد آنتی بادی اختصاصی و واجد جذب بالا در آزمون الایزا بودند، انتخاب گشتند. سپس بر روی آنها آزمون آخرین حد رقت (Limiting dilution) انجام شد و تک کلون های تولیدکننده آنتی بادی منوکلونال علیه آنتی ژن A60 تکثیر شدند.بحث و نتیجه گیری: بهتر است در تهیه آنتی بادی منوکلونال علیه آنتی ژن A60 اپی توپ های ویژه گونه ای به خوبی شناسایی شوند تا آنتی بادی منوکلونال تولید شده علیه این آنتی ژن با سایر گونه های مایکوباکتریوم واکنش متقاطع نداشته باشند.

مقدمه و هدف: لیپوآرابینومان مانوزیله (ManLAM) از آنتی ژن های گلیکولیپیدی است که درصد قابل توجهی از دیواره سلولی باکتری مایکوباکتریوم بویس ب ث ژ را تشکیل می دهد. نظر به اینکه تولید آنتی بادی منوکلونال آن، به ویژه در طراحی کیت تشخیص سریع بیماری سل کاربردهایی فراوان دارد، لذا هدف از تحقیق حاضر، تولید آنتی بادی منوکلونال ضد این آنتی ژن می باشد.مواد و روش کار: پس از تزریق های منظم موش های BALB/c با BCG سونیکیت شده، آنتی ژن LAM، تیتر آنتی بادی تولید شده بررسی گردید. لنفوسیت های طحالی موش ها و سلول های میلومای Sp2.0 با کمک پلی اتیلن گلیکول امتزاج داده شدند. سلول ها در محیط HAT انتخاب شدند و کلون های مولد آنتی بادی ضد آنتی ژن LAM با استفاده از آزمون الایزا شناسایی شدند؛ پس از تخلیص آنتی بادی منوکلونال، شناسایی آنتی ژن های لیپوآرابینومان مانوزیله و BCG سونیکیت شده با روش وسترن بلاتینگ انجام گرفت.نتایج: تعداد 2 کلون H2-3B9, H1-3D3 مولد آنتی بادی اختصاصی با جذب بالا در آزمایش الایزا، انتخاب شدند. نتایج وسترن بلاتینگ، باند 30 کیلو دالتونی مربوط به آنتی ژن های لیپوآرابینومان مانوزیله و BCG سونیکیت شده با استفاده از آنتی بادی های منوکلونال IgM و IgG3 را تایید می کرد.نتیجه گیری: نتایج نشان داد که امکان تولید و تخلیص آنتی بادی منوکلونال با استفاده از امتزاج لنفوسیت های B طحال موش های ایمن شده و سلول های میلوما وجود داشته، تایید واکنش اختصاصی آنتی بادی مذکور قبل از انجام مطالعات تشخیصی در شناسایی سریع سل در ادرار بیماران و بررسی های مصونیت زایی واکسن ب ث ژ مورد توجه خواهد بود.

مقدمه: با وجود پیشرفت و گسترش تحقیقات در زمینه تولید مثل و ناباروری و به ویژه فرآیند لقاح، در حال حاضر تعداد اندکی از آنتی ژن های موثر در فرآیند لقاح در سطح اسپرم و تخمک، شناسایی شده است. مطالعه این مولکول ها و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی، بیوفیزیکی و فیزیولوژیکی آنها، درک هرچه بهتر فرآیند لقاح را تسهیل می کند. گذشته از آن، علت اصلی درصد بالایی از ناباروری های با علت نامشخص که ناشی از وجود نقایص مولکولی آنتی ژن های دخیل در عمل لقاح می باشند، لذا هدف این مطالعه تعیین خصوصیات آنتی ژن مورد شناسائی توسط آنتی بادی منوکلونال HS56 می باشد.مواد و روشها: سلول های هیبریدومای مولد آنتی بادی منوکلونال HS56 علیه آنتی ژن سطحی اسپرم انسان به صفاق موش های نر بالغ 8-6 هفته تزریق شدند تا مقادیر زیاد آنتی بادی از مایع آسیت، به دست آید. آنتی بادی مذکور توسط ستون افینیتی کروماتوگرافی پروتیین G، تخلیص و ایزوتیپ این آنتی بادی توسط آزمون الایزا تعیین گردید. آنتی ژن های سطحی اسپرم انسان توسط لیتیوم دی یدوسالیسیلات (LIS) استخراج و الکتروفورز SDS-PAGE روی این آنتی ژن ها انجام گرفت. به منظور تعیین وزن مولکولی و برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنتی ژن مورد نظر، وسترن بلاتینگ انجام شد و محل قرارگیری این آنتی ژن در سطح اسپرم انسان به کمک آزمون ایمنوفلورسانس غیرمستقیم بررسی شده و در نهایت تاثیر یا عدم تاثیر این آنتی ژن در واکنش آکروزومی مورد بررسی قرار گرفت. تحلیل داده ها بر اساس مقایسه داده های زوج شده و آزمون Wilcoxon Signed Ranks Test انجام و سطح معنی داری، 05/0 در نظر گرفته شد.نتایج: با تکنیک SDS-PAGE الگوی الکتروفورتیک آنتی ژن های استخراج شده با نمک LIS، مشاهده شد و با آزمون الایزا مشخص شد که آنتی ژن مورد شناسایی توسط آنتی بادی منوکلونال HS56، در مجموعه آنتی ژنی استخراج شده از سطح اسپرم با استفاده از LIS، وجود دارد. ایزوتیپ آنتی بادی منوکلونال HS56 از نوع IgG1 تعیین شد. پس از انجام وسترن بلاتینگ، مشخص شد که وزن مولکولی آنتی ژن مورد نظر حدود 56±2 kDa است و در ساختار مولکول پروتیین مورد نظر، باند دی سولفیدی وجود دارد. آزمون ایمنوفلورسانس غیرمستقیم نشان داد که محل قرارگیری این آنتی ژن در ناحیه آکروزومی و گردن اسپرم می باشد. با مجاور نمودن آنتی بادی منوکلونال با اسپرم و القاء واکنش آکروزومی، مشخص شد که بلوکه کردن این اپی توپ با آنتی بادی منوکلونال HS56، تاثیری در واکنش آکروزومی ندارد (P=0.11).نتیجه گیری: بر اساس بررسی های انجام شده، هرچند آنتی ژن HS56 در ناحیه آکروزومی و سراسپرم قرار دارد ولی نقش اساسی در فرآیند واکنش آکروزومی دارا نمی باشد. بررسی بیشتر این آنتی ژن بوسیله تخلیص و بررسی ساختار مولکولی آن و نیز نقش آن در اتصال اسپرم و تخمک، ارزش این آنتی بادی را مشخص خواهد نمود.